Съдържание
Електрофореза с агарозен гел е научна процедура, използвана в изследователски и диагностични проекти, включващи изследване на нуклеинови киселини. Тя позволява на учения или техник да разделя заредените молекули на нуклеинова киселина, като ДНК, в зависимост от техния размер, и се използва за анализ на продуктите, генерирани от експеримента, като полимеразна верижна реакция. Той се използва рутинно, тъй като е евтин за провеждане, бърз процес и позволява възстановяване на анализираната нуклеинова киселина.
Осъществяване на гела
Съберете всички необходими елементи и ги почистете с 70% етанол. Елементите включват тава за гласове, лепенка, лабораторна агароза, колби или бутилки, 10x концентрация (Tris-Borate-EDTA, TBE) буфер, етидиев бромид, багрило и проба за анализ. Също така се уверете, че имате резервоар за гел електрофореза и източник на енергия. Агарозата се приготвя чрез претегляне на подходящото количество ДНК лента, която трябва да се анализира, като се смесва с TBE буфера и се топи в микровълновата пещ. Като цяло, 1% до 2% разтвор е достатъчен, за да покрие много нишки на ДНК, изследвани в дневната молекулярна биология. Малките ДНК-та изискват по-концентрирани гелове, докато по-големите изискват по-разредени гелове. Агарозният разтвор се смесва с етидиев бромид, който се свързва с нуклеиновата киселина по време на процедурата по електрофореза. Този разтвор се изсипва в стопилката в гела, точно когато се постави формовъчен гребен и сместа се оставя да се втвърди.
Поставете и активирайте гела
Гелът се отстранява от таблата и се потопява в резервоар за гел електрофореза, съдържащ течен буфер. Пробите за анализ се смесват с багрила и се поставят в ямки в гела, създаден от гребена. Включен е също маркер или скала, за да се позволи на изследователя да види напредъка на електрофореза и да определи размера на генерираните фрагменти. След това към гела се прилага електрически ток, който принуждава пробата да мигрира от единия край на гела до другия. По време на този процес, нуклеиновите киселини в пробата се разделят на фрагменти с различни размери, като по-големите молекули се доближават до ямката и по-малките молекули се движат към другия край на гела.
Анализирайте гела
След приключване на процедурата по електрофореза гелът се отстранява от резервоара и се поставя в UV трансилюминатор, който осветява фрагментите на нуклеиновата киселина, които се свързват с флуоресцентния етидиев бромид. Направена е снимка на това и лентите на нуклеиновите киселини могат да бъдат измерени според разстоянието, което е мигрирало през гела. Скалата ще ги раздели на ленти с известни размери и може да се използва за насочване на изследователя по време на анализа.