Съдържание
Туберкулозата е инфекциозно заболяване, причинено от бактерията Mycobacterium tuberculosis и е респираторно заболяване, характеризиращо се с туберкулозни образувания, некроза, абсцеси, фиброза и калцификация в белите дробове. Също така може да зарази бъбреците, лимфните възли, костите, ставите и кожата.
Първичната лабораторна диагноза на този бацил включва оцветяването му, за да визуализира бактериите под микроскоп. Избраната проба е храчка или бронхоалвеоларен лаваж за идентифициране на респираторна инфекция или проба от действителна тъкан.
Физиология
Mycobacterium tuberculosis е пръчковиден организъм (бацили), неподвижен, незадължителен спор. Тази бактерия е с дължина 0,4x3 микрометра и се подлага на бинарно делене (разделяне на репродуктивната клетка) на всеки 15 до 24 часа, което се счита за бавно в сравнение с други бактерии. Поради това на микобактериите може да отнеме до девет седмици, за да се появи в хранителната среда.
Този организъм е чувствителен към UV светлина и топлина (като пастьоризация), но се противопоставя на химически дезинфектанти.
Грам петно
Mycobacterium tuberculosis не може наистина да бъде класифициран като грам-положителни или грам-отрицателни. Тази класификация се прави въз основа на количеството пептидогликан в клетъчната стена на бактерията. Грам-положителните видове имат дебел слой от тази молекула (около 90%), докато грам-отрицателните видове имат тънък слой (от 5% до 20%). Грам петна проникват в клетъчната стена и се свързват с химичните компоненти в нея. Под микроскопа оцветените бактерии ще станат лилави или розови.
При микобактерията туберкулоза клетъчната стена е съставена от пептидогликан, но също и сложни липиди, които инхибират проникването на грам багрило. Клетъчната стена също се противопоставя на обезцветяване от киселина или алкохол, поради което микобактерията се нарича "киселинно-устойчива". Липидите на клетъчните стени са миколова киселина, струнен фактор и D-восък. Ако бактериите трябваше да бъдат оцветени, клетките щяха да изглеждат грам-положителни или леко бледи с много малко цвят.
За да видите бактериите, трябва да се използват специални петна, като петно Aumarine или Zhiel-Neelson.
Аумарин-родаминово петно
Процесът с използване на аурамин-родамин използва жълто флуоресцентно багрило за визуализиране на микобактерията туберкулоза под флуоресцентен микроскоп. Като контрастно багрило може да се използва калиев перманганат или акридин оранжев. Под лещата бактериалните клетки ще изглеждат зелени.
Аурамин-родаминовото багрило е по-чувствително от Zhiel-Neelson и по-икономически изгодно.
Оцветяване на Ziehl-Neelson
Петното на Ziehl-Neelson е създадено от учените Franz Ziehl и Friedrich Neelsen и използва нагрет карбол-фуксин, висока концентрация на киселинен алкохол и контрастно багрило, като зелен малахит или метиленово синьо. Под флуоресцентен микроскоп бактериалните клетки ще изглеждат ярко розови.
Боята Ziehl-Neelson е стандарт за върхови постижения за предварителна идентификация на mycobacterium tuberculosis и mycobacterium leprae.
Агар
В допълнение към идентифицирането на микроскопията, микобактерията туберкулоза трябва да се отглежда върху специална агарова култура. Желатинът Lowenstein-Jensen съдържа сложни органични вещества (като яйца и картофи), соли, глицерол и малахит зелено (което инхибира други бактерии). Антибиотици могат да бъдат добавени за по-нататъшно инхибиране на замърсяващи микроорганизми. Пробата се поставя върху този агар и бактериите растат след три до девет седмици.
Разтвор на хранителна култура, като албумин и биотин, може да се използва за подпомагане на растежа дори на най-малкото количество целеви бактерии. Това е известно като Middlebrook 7H9 (или 7H12).
И в двете среди колониите ще изглеждат като малки, полирани, светлокафяви колонии.
С усъвършенствана технология микобактерията туберкулоза вече може да се отглежда с помощта на автоматизиран четец. Течен разтвор на средата Middlebrook 7H9 и флуоресцентно индикаторно съединение се използват за наблюдение на растежа и докладване за положителна или отрицателна инфекция.