Съдържание
Химичните съединения цетилтриметиламониев бромид, хексадецилтриметиламониев бромид, пальмитилтриметиламониев бромид и цетримониев бромид са известни също от CTAB. Химикалът се използва като рН-поддържащ в последователния геном на ДНК, особено в растенията.
Смилането разрушава клетъчните стени на растенията за извличане на ДНК (Джейсън Рийд / Райън Маквей / Digital Vision / Getty Images)
Формула CTAB
Количествата на формулите на различните химикали CTAB се различават в зависимост от лабораторията. Обаче, всички съставки включват 1 М Tris HCl рН 8.0, 0.5 М EDTA, 5 М NaCl и Н20 (понякога два пъти дестилирани). За CTAB компонент някои лаборатории използват цетилтриметиламониев бромид и други хексадецилтриметиламониев бромид.
Приготвяне на растителни тъкани
Получаването на растителната тъкан може да варира в зависимост от материала. Стени и клетъчни мембрани трябва да бъдат счупени, за да се получи достъп до ядрен материал без никаква деградация. Обикновено при смилането растителният материал с течен азот позволява достъп до ДНК, поддържане на вредни клетъчни ензими и неактивни химикали.
Суспензия и центрофугиране
Натрошената тъкан се поставя върху CTAB острието и се поставя в купа с течаща вода. След това се смесва с хлороформ и се центрофугира за отделяне на разтворимите протеини и други материали. След това ДНК се утаява от водната фаза и внимателно се промива за отстраняване на замърсяващите соли. Пречистената ДНК след това се изтегля и се съхранява в ТЕ слайд или стерилна дестилирана вода.