Как се правят гелове от агароза

Видео: креатин киназа : изоферментов и клиническая значение: CK, CK-MB или же CK2

Съдържание

инструкции
Получаване на агарозен гел
предупредителен
Какво ви трябва

Агарозните гелове са направени от учени, работещи в лаборатории за молекулярна биология, за изследване на ДНК фрагменти, които са модифицирани по време на експериментална работа. Техниката на приготвяне на агарозен гел е основно рутинно умение, което трябва да се усвои от всички изследователи, тъй като позволява директна визуализация на различни размери на ДНК за проекти за верификация и клониране на гени. Въпреки че приготвянето на гел не е трудно, както при всички лабораторни процедури, то трябва да бъде изпробвано само от специалист, който е научно обучен заради биологичните рискове.

инструкции

Как се правят гелове от агароза (Comstock Images / Comstock / Getty Images)

Получаване на агарозен гел

Уверете се, че основите на гела нямат пукнатини или нещо, което може да причини изтичане на горещата агароза. Почиствайте тавите с 70% алкохол и се оставяйте да изсъхне напълно. Основата има два отворени края и два затворени края. В някои формати, клиповете са снабдени с тях, за да се затворят краищата, но повечето трябва да бъдат запечатани, като се поставят лентови ленти между отворените части. Натиснете лентата здраво и здраво, тъй като те могат да се отдалечат от държача и да позволят на горещата агароза да изтече.
Въз основа на размера на ДНК фрагмента, който трябва да се раздели и анализира на агарозен гел, се определя подходящият процент, който ще бъде необходим. Например, при 1% (w / v) агарозен гел ще бъде ефективен за анализа на 0.5 до 10 kb ДНК сегмента. Колкото по-голям е процентът (повече агароза), толкова по-малки са фрагментите, които могат да бъдат разделени. Рутинните експерименти използват диапазон от 0.5% до 2% агароза. За 1% агарозен гел се претегля 1 g агарозен прах в химическа превръзка или друга система за задържане. Преместете внимателно в зоната на лабораторната подготовка на гела.
В подходящата област за приготвяне на гел се измерват 100 ml буфер за електрофореза. Трябва да е при стайна температура. Агарозният прах се прехвърля в огнеупорна колба и се излива измерения обем от буфер за електрофореза. Сместа леко се загрява в микровълнова фурна, но не се вари, тъй като изпарението може да промени процента на присъстващия агароза. Уверете се, че цялата агароза е разтворена, разклатете я добре, разбъркайте, оставете леко да изстине и след това добавете 0,5 микрограма на милилитър етидиев бромид. Не вдишвайте пари, тъй като това може да раздразни белите дробове и тъканите на лигавицата. Също така, не нагрявайте разтвора след добавянето на етидиев бромид. Разклатете отново, за да се разбърка, и след това, докато разтворът е достатъчно горещ, за да се разлее, поставете го в подготвената основа. Отбележете, че ако има голям обем от проба или малка концентрация на ДНК, може да се направи по-дебел гел. Въпреки това, по-фините гелове са по-лесни за анализ, защото те ще бъдат по-ясно снимани.
Поставете гребените в гела, за да създадете канали или кладенци за пробата, която ще се постави. Оставя се да се охлади до стайна температура за няколко часа или в хладилник за няколко минути. В последния случай, след като гелът е готов, трябва да се наблюдава присъствието на агарозни кристали. Обикновено те изчезват, ако гелът се остави да се затопли до стайна температура върху плота за няколко минути преди употреба. Внимателно отстранете гребените, за да не разкъсате гела или да счупят ямките. Агарозният гел е готов за употреба. Ако не се използва незабавно, трябва да бъде опакован в целофан или да се съхранява в пластмасов контейнер в хладилника, за да се предотврати изсушаване или топене.

предупредителен

Използваните реактиви са възможни канцерогени и с тях трябва да се работи внимателно и с адекватна защита. Ако по време на приготвянето на гела е допусната грешка, тя никога не трябва да се нагрява, а се елиминира и се приготвя нов гел.